АЖФК (Агар желчный фиолетово-красный)

ТУ 10.02.850-90

Номенклатурный номер: 01120202

(производство ВНИИМС – филиал ФГБНУ «ФНЦ пищевых систем им. В.М. Горбатова» РАН)

Для проведения микробиологического контроля необходимо располагать комплексом питательных сред, обеспечивающим контроль всех значимых групп микроорганизмов. Выбор питательной среды определяется специалистами предприятия, проводящими микробиологический контроль и отвечающими за безопасность и качество выпускаемой продукции.

Основное требование, предъявляемое к питательным средам, – обеспечение ростовых характеристик и специфичности на уровне арбитражных сред, т.е. сред, использование которых регламентировано нормативными документами (национальными стандартами).

Рабочие питательные среды для посевов готовят из сухих питательных сред, путем их растворения в воде с последующей стерилизацией в соответствии с инструкцией по приготовлению.

Для приготовления рабочих питательных сред используют водопроводную или дистиллированную воду. Водопроводную воду питьевого качества рекомендуется предварительно выдержать на свету в течение суток, прокипятить в открытом сосуде 30 мин и охладить до комнатной температуры. Активная кислотность воды должна составлять 7,2-7,6 ед. рН. При использовании дистиллированной воды необходимо контролировать и доводить рН среды, т.к. рН дистиллированной воды имеет кислые значения.

Подготовленную воду используют для приготовления питательных сред и растворов для разведений.

Определение активной кислотности (рН) питательных сред

Определение активной кислотности (рН) питательных сред проводят с помощью анализатора потенциометрического для контроля рН по прилагаемым инструкциям. Ориентировочное определение активной кислотности (рН) питательных сред может проводиться с помощью индикаторных бумажек или готового универсального индикатора.

Контроль качества рабочих питательных сред

Качество вновь приготовленных питательных сред проверяют путем параллельного посева одних и тех же проб на новую и ранее используемую среду. Результат считается удовлетворительным при получении данных одного порядка.

Контроль стерильности рабочих питательных сред осуществляют путем термостатирования пробы среды при 37 °С в течение 48 ч. Если после термостатирования на средах отсутствуют признаки роста, то среда считается стерильной.

Хранение рабочих питательных сред

Если особые условия хранения конкретной рабочей питательной среды не оговорены в инструкции по ее применению, то среды хранят в холодильнике не более 3 мес. или при температуре 18-23 °С не более 1 мес. при условии сохранения внешнего вида среды.

ИНСТРУКЦИЯ по приготовлению и использованию агара желчного фиолетово-красного (АЖФК)

АЖФК используют для определения количества БГКП при микробиологическом контроле продуктов, а также при контроле объектов производственной среды при необходимости подсчета КОЕ.

Приготовление: 3,5 г сухой среды вносят в 100 см³ дистиллированной воды, тщательно перемешивают, нагревают до полного расплавления агара и кипятят 5 мин, не допуская пригорания.

Среду готовят непосредственно перед посевом. Допускается хранение среды, разлитой в пробирки или флаконы, прокипяченной в водяной бане или пастеризованной текучим паром в автоклаве (30±1) мин, в течение 7 сут.

Готовая среда должна иметь фиолетово-красный цвет.

Использование: перед выполнением анализа среду расплавляют на водяной бане (или пользуются свежеприготовленной средой), охлаждают до (50±1) °С и разливают в стерильные чашки Петри примерно по (12±1) см³, чтобы дно чашки было покрыто равномерным слоем среды толщиной (2±0,5) мм. Чашки оставляют с приоткрытыми крышками на (60±5) мин для подсушивания. Затем закрывают, маркируют и используют для анализа.

Разведения молока после пастеризации или сыра готовят в соответствии c таблицей 1.

Таблица 1

Поверхностный посев. Каждое из выбранных разведений засевают по
0,1 см³ поверхностным способом, используя для равномерного распределения образца по поверхности плотной среды шпатель Дригальского. После посева чашки Петри переворачивают крышками вниз и ставят в термостат при  (37±1) °С на 24 ч.

Ведут подсчет розовато-фиолетовых колоний диаметром более 0,5 мм с более светлым по сравнению с центром ореолом.

Количество БГКП в 1 г или 1 см³ образца определяют умножением числа колоний в каждой чашке Петри на 10 и на соответствующее разведение.

Глубинный посев.  Каждое разведение вносят по 1 см³ в отдельную чашку Петри и заливают расплавленной и охлажденной до (45±1) °С питательной средой. Затем содержимое чашки тщательно перемешивают путем легкого вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала. После застывания агара чашки переворачивают крышками вниз и ставят в термостат при температуре (37±1) °С на 24 ч.

При глубинном посеве БГКП образуют мелкие колонии красного цвета.

Число колоний в каждой чашке пересчитывают на 1 г или 1 см³ продукта путем умножения числа выросших колоний на каждой чашке Петри на соответствующее разведение.

Оценку результатов определения количества БГКП при производстве сыров на АЖФК проводят в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2